—个性化定制您理想的细胞系细胞永生化（Cellimmortalization）是指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力的过程。正常组织来源的细胞在通常的体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和**。而细胞培养是一项基本的科研技术，无论是基础的科学研究，还是在临床***，上海动物细胞永生化，以及生物工程制药，疫苗研发等方面，都发挥着重要的作用。利用基因转染等技术将外源性永生化基因导入目的细胞内，从而建立永生化细胞株，以达到使体外培养的细胞具有无限增殖能力且细胞间无差异的目的。对细胞永生化进行深入研究，不仅有利于我们了解细胞增殖与衰老的分子机制，上海动物细胞永生化，而且为探寻*****及***移植的研究奠定了坚实的基础。此外，由于永生化细胞具有可以多次传代的特性，可以利用各种细胞永生化的方法使那些传代困难，上海动物细胞永生化、增殖缓慢、容易衰老的细胞获得永生，从而为研究人员提供更多的细胞资源，为科学研究提供了良好的体外细胞模型。细胞永生化的机理与建立方法由于体外培养细胞自发性永生化率非常低，目前普遍采用基因转染技术将外源性永生化基因导入目的细胞内,以增加永生化。
一、 试剂
1、 淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。
2、 全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青**和链**。
3、 环胞酶素A（CyA）：5ml(250mg)/瓶，用1640培养基稀释成0.2mg/ml，使用时终浓度为2ug/ml(0.5%)。
4、 EBV液购自中国科学院遗传所，储存于零下80度。使用时从冰箱中取出，37度迅速融化，用0.22um的滤膜过滤，不要超过0.5-1小时。
二、 建株方法
1、 取外周血3-4ml，肝素抗凝（血液室温可放置48小时），应用液浓度5u/ml，可加入5-10ml外周血。
2、 将血液与等量1640培养液混匀后，沿管壁渐渐加入到含有4ml淋巴细胞分离液的离心管中（混合血：淋巴细胞分离液=6：4），3000转离心10分钟。
3、 吸取白细胞层，移入另一支离心管中，加入不含血清的1640培养液6ml，轻轻混匀，进行***次洗涤。1500转离心15分钟。
4、 弃上清液，再加6ml1640全培养液进行第二次洗涤，离心1500转15分钟。
5、 弃上清液，加入2ml1640全培养基（全培养基加入前，置37度水浴10分钟），然后加入环胞**A（4%）和1.2mlEBV液/份，充分混匀后移入到25平方厘米的培养瓶，置37度，5%CO2培养箱中。
6、 每2-3天加入3ml新鲜配制的培养基（1.6% 1M HEPES 缓冲液；15%胎牛血清（FBS）；1%青**和链**；PRMI 1640补足到**）。7天左右镜下观察，可见淋巴细胞明显增大，出现聚集现象。
联系方式
仲绪军
18621867065
供应商信息
上海朝瑞生物科技有限公司
| 企业类型 | 联营企业 | 经营模式 | 商业服务 | ||
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| 注册资本 | - | 员工人数 | - | ||
| 企业注册地 | 上海 | 经营方向 | 销售 | ||
| 成立时间 | 2003 | 主营行业 | 农业-农林牧渔项目合作 | ||
| 主要经营地点 | - | ||||
| 主营产品或服务 | 科研技术服务,应用技术服务,科研成果转化,科学产品销售 | ||||
