实时荧光定量常用Taqman探针法和SYBR Green I法两类。
1.TaqMan探针法
TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理为有一对 PCR 引物和一条探针存在于PCR 反应体系中，有荧光淬灭基团存在于3′
端标记，北京**基因荧光定量PCR技术服务，有报告基团存在于探针的5′ 端标记，探针仅和模板特异结合，两条引物之间是其结合点。因此信号仪器搜集不到，伴随反应的进展，探针在外切核酸酶的活性的作用下被切断，从而造成淬灭基团不能吸收基团的荧光能量，从而使荧光信号产生，所以模板 DNA 的拷贝数取决于信号的强度。
2.SYBR Green I法
SYBR Green I为一种具有绿色激发波长的染料，其发射波长比较大约为 520 nm，北京**基因荧光定量PCR技术服务，北京**基因荧光定量PCR技术服务，比较大吸收波长约为 497 nm，能够结合所有的双螺旋小沟区域。由于处于游离状态，SYBR Green I发出的荧光较弱，然而其结合双链 DNA之后，就会使得荧光大大增强，荧光信号的增加完全同步PCR 产物的增加。
实时荧光定量PCR的应用
目前，qPCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业，应用于**的早期诊断、遗传病的早期诊断、***研究、**的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等，除此之外，还包括：
● 基因扩增
● 扩增特异性分析
● 基因定量分析
● 基因检测
● 基因分型
● SNP分析
● RFLP多态性分析
● 单/多基因表达研究
● 高通量基因表达谱研究
实时荧光定量PCR技术，顾名思义，就是在PCR的基础上加入荧光基团，通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程，***通过对未知模板进行定量分析的方法。
为了正确地评估 PCR 效率，至少需要 3 次重复和至少 5 个数量级倍数的模板浓度。图 6 说了建议此**级别的理由，它证明在 1 个数量级倍数与 5 个数量级倍数范围内测试稀释模板时，获得的斜率或效率可能产生数学偏差。因此，即使检测 ** 有效，由于每个稀释点都存在标准差，检测一个数量级倍数的连续稀释时，可能获得 70 至 170% 的范围。在 5 个数量级倍数范围内做相同数量的稀释点或重复，可能的偏移只有 ±8%。这意味着在 5 个数量级倍数范围内，如果效率为 94%，则该实验的效率范围介于 88% 到 ** 之间。为了准确测定 PCR 反应的效率，必须进行 5 个数量级倍数的连续稀释。-3.3 ±10% 的斜率意味着效率达到 ** ±±10%。PCR 反应效率越低，那么灵敏度越低。
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仲绪军
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| 企业类型 | 联营企业 | 经营模式 | 商业服务 | ||
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| 注册资本 | - | 员工人数 | - | ||
| 企业注册地 | 上海 | 经营方向 | 销售 | ||
| 成立时间 | 2003 | 主营行业 | 农业-农林牧渔项目合作 | ||
| 主要经营地点 | - | ||||
| 主营产品或服务 | 科研技术服务,应用技术服务,科研成果转化,科学产品销售 | ||||
