使用可高压处理的移液器，由于移液器容易受产物气溶胶或标本 DNA 的污染，因此要使用可高压处理的移液器 。严格按照试验的分区进行操作，按照提取区、扩增区、检测区单方向流动，物品、样品和试剂不可逆向流动 ，江苏病原微生物荧光定量PCR实验技术服务。操作多份样品时，制备反应混合液，先将荧光 PCR 反应液、荧光探针和酶混合好，江苏病原微生物荧光定量PCR实验技术服务，然后分装到每个 PCR 管中，这样即可以减少操作次数，避免污染，又可以增加反应的**度 。加样品，江苏病原微生物荧光定量PCR实验技术服务、加蛋白酶 K 和加样品过程中，特别注意防止样品的交叉污染和酶的降解 。操作时设立阴性及阳性对照，可验证荧光 PCR反应的准确性和可信性
一个评估 PCR 效率的关键参数是 R2，它是说明如何使用一个数值预测另一个数值的相关程度的统计学术语。如果 R2 为 1，那么 Y 值 (Ct) 可以用来准确预测 X 值（图7A）。如果 R2 为 0，那么就不能通过 Y 值预测 X 值（图 7B）。R2 值 >0.99 表示两个数值之间相关的置信度良好。
**度
标准差（偏差的平方根）是**常用的**度计量方法。如果许多数据点都靠**均值，则标准差就小；如果许多数据点都远离平均值，则标准差就大。
实际上，足够多重复次数产生的数据集会形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限定理来证明，该定理称大量独立同分布随机变量的和在无限多时趋向于正态分布。如图 8A 所示，约 68% 的值在平均值的 1 个标准差之内，约 95% 的值在平均值的 2 个标准差之内，约 99.7% 的值在平均值的 3 个标准差之内。
实时荧光定量常用Taqman探针法和SYBR Green I法两类。
1.TaqMan探针法
TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理为有一对 PCR 引物和一条探针存在于PCR 反应体系中，有荧光淬灭基团存在于3′
端标记，有报告基团存在于探针的5′ 端标记，探针仅和模板特异结合，两条引物之间是其结合点。因此信号仪器搜集不到，伴随反应的进展，探针在外切核酸酶的活性的作用下被切断，从而造成淬灭基团不能吸收基团的荧光能量，从而使荧光信号产生，所以模板 DNA 的拷贝数取决于信号的强度。
2.SYBR Green I法
SYBR Green I为一种具有绿色激发波长的染料，其发射波长比较大约为 520 nm，比较大吸收波长约为 497 nm，能够结合所有的双螺旋小沟区域。由于处于游离状态，SYBR Green I发出的荧光较弱，然而其结合双链 DNA之后，就会使得荧光大大增强，荧光信号的增加完全同步PCR 产物的增加。
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