【北京艾德莱】最好的反转录酶 逆转录酶 RT-PCR MMLV Reverse Transcriptase
【北京艾德莱】最好的反转录酶、逆转录酶 RT-PCR MMLV Reverse Transcriptase厂家直销
制品说明:本制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TUREscript Hˉ RTase。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。
适用范围:第一链cDNA合成。可用于低拷贝基因的检测。
特点:合成cDNA片段长度最高可达12 kb。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1.加入
Components Volume
Total RNA/mRNA 50 ng-5 μg/5-500 ng
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or 1 μl
Random Primer(0.1 μg/μl) or 1 μl
GSP(Gene Specific Primer) 2 pmol
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
5× RT Buffer 4 μl
RNase Inhibitor(40 units/μl) 0.5 μl
TUREscript Hˉ RTase 1 μl
RNase free H2O to final volume 20 μl
2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP),42℃孵育50min。
如用Random Primer,25℃孵育10 min,42℃孵育50 min。
3.65℃加热15 min失活TUREscript Hˉ RTase。
RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
建议PCR条件(以50 μl反应体系为例)
注意事项:
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3.如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。