【北京艾德莱】TOP10感受态细胞供应 TOP10感受态细胞产品使用说明

TOP10感受态细胞产品介绍： 本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达108 ，－70 ℃ 保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。 TOP10菌株的基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(Starr) endA1 nupG 产品特点： 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型株。其φ80 lacZΔM15 基因的产物可与pUC 载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。 操作步骤： ? 感受态细胞应保存在－70℃ ，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。 ? 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。 ? 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。 ? 感受态细胞融化后做短暂离心，可得到最大体积的感受态细胞。 以下操作均按无菌条件的标准进行： 1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 一次转化感受态细胞的建议用量为50μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。 2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA ( 50μl的感受态细胞能够被1ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30 分钟。 3. 将离心管置于42 ℃ 水浴中放置60-90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 分钟，该过程不要摇动离心管。 （可选）此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至8-15 分钟左右。 条件允许建议使用42 ℃ 热激方法。 4. 向每个离心管中加入500μl无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37 ℃ 150rpm，摇床振荡培养45 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 5. 将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37 ℃ 培养12-16 小时。 涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量