碧云天Beyotime杆状virus穿梭载体bacmid小量抽提试剂kit盒

碧云天生产的杆状virus穿梭载体bacmid小量抽提试剂kit盒(Baculovirus Shuttle Vector Bacmid Mini Preparation Kit, 简称Bacmid Miniprep Kit)是一种从大肠杆菌DH10Bac中简单抽提高质量可完美应用于昆虫细胞转染的bacmid的试剂kit盒。主要特点：简单，不使用剧毒试剂，无须酚氯抽提，无须过柱纯化，解决bacmid分子量大、抽提难度高等系列问题，确保抽提获得的bacmid可完美用于昆虫细胞转染。当目的基因插入到pFastBac系列载体中构建成目的重组质粒后，该重组质粒可用于转化大肠杆菌DH10Bac从而发生位点特异的转座(site-specific transposition)，蓝白斑筛选和PCR鉴定筛选含有重组bacmid的重组子，再使用本试剂kit盒进行bacmid的小量抽提即可获得可转染昆虫细胞的bacmid DNA。本试剂kit盒在抽提bacmid的同时，也会抽提辅助质粒(helper plasmid)和未重组的pFastBac质粒。抽提获得的bacmid等质粒混合物可以直接用于转染昆虫细胞以包装杆状virus，用于目的蛋白在昆虫细胞中的大量表达。Bac-to-Bac杆状virus表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快的产生重组杆状virus的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因插入后受杆状virus特异性启动子(baculovirus-specific promoter)调控表达；(2)含杆状virus穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。利用Bac-to-Bac杆状virus昆虫细胞产生重组蛋白主要包括以下实验步骤：(1)把目的基因到pFastBac载体产生重组质粒；(2)转化pFastBac重组质粒到DH10Bac大肠杆菌感受态细胞产生重组bacmid；(3)利用杆状virus穿梭载体bacmid小量抽提试剂kit盒提取重组bacmid DNA；(4)将重组bacmid DNA转染进入昆虫细胞(推荐使用碧云天的C0551 LipoInsect™转染试剂)以产生重组杆状virus。本试剂kit盒抽提获得的高质量bacmid DNA可以直接用于转染昆虫细胞，碧云天生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)适用于将pFastBac等杆状virus表达载体制备的bacmid转染到Sf9、Sf21和High Five™等昆虫细胞以用于Bac-to-Bac®、BaculoDirect™和InsectSelect™表达系统的蛋白表达。LipoInsect™转染试剂的转染效率非常高，对昆虫细胞Sf9的实测阳性率可达98%以上。关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍，请见如下网页： http://www./support/insect cell.htm。一个包装的本产品可以进行50次bacmid的小量抽提。包装清单：

保存条件：室温保存，保质期一年。注意事项：初次使用前把试剂kit盒提供的RNase A全部加入到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后须4℃存放。温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。溶液II使用完后，请注意盖紧瓶盖，以避免被空气中二氧化碳酸化。本试剂kit盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行，但在4℃进行离心也是可以的。溶液II有强碱性，溶液II和溶液III对人体都有刺激性，操作时请小心，产品并注意适当防护。

本产品供从业人员的科学研究用，不得用于临床诊断，不得用于食品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。