碧云天Beyotime质粒大量通用型抽提试剂盒

碧云天的质粒大量抽提试剂kit盒(通用型) (Plasmid Maxi Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Maxiprep Kit for All Purpose)是一种用于从大肠杆菌中进行大量质粒抽提的通用型离心柱式试剂kit盒。本试剂kit盒不仅适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 e等，也适用于EndA+菌株如JM110、BL21 (DE3)、TG1和HB101等，能避免EndA+菌株中高丰度核酸酶的污染，并适用于从糖类修饰水平高的野生菌株中提取质粒。野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I，能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA，如果endA突变失活，其基因型会被标注为endA1，相应的突变菌株被称为EndA-菌株，而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒，微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化，导致容易降解，而本试剂kit盒增加了特殊的洗涤步骤(核酸酶洗涤液溶液PB洗涤)，可以避免EndA+菌株中抽提获得的质粒容易降解的问题(参考图1)。

图1. 使用溶液PB可以使从EndA+菌株JM110中抽提的质粒不易降解，而对于EndA-菌株DH5α中抽提的质粒没有影响。使用本试剂kit盒时，如上图所示，在使用和不使用溶液PB时的质粒得率一致。但对于EndA+菌株JM110，不使用溶液PB时从其中抽提获得的质粒在内切酶缓冲液Buffer Y中37℃孵育1小时后会全部降解，而使用溶液PB时同样孵育1小时就不会降解。对于EndA-菌株DH5α无论是否使用溶液PB，抽提获得的质粒的都很稳定。

本试剂kit盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的纯化。无需酚氯抽提，无需乙醇沉淀，6个样品只需不足90分钟即可完成。每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为500微克。每个纯化柱可用于抽提约100毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。本试剂kit盒抽提所得到的质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化tissue，内切酶消化等。本试剂kit盒在使用溶液PB的情况下，获得的质粒的纯度更高，总体上转染细胞的效率会显著提高。包装清单：

保存条件：室温保存，保质期一年。注意事项：初次使用前把试剂kit盒提供的RNase A全部加到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。初次使用前请根据说明书和瓶上的标示，在每瓶溶液IV (洗涤液)中加入150ml，混匀，并在瓶上做好标记。温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。溶液II有强碱性，溶液II、溶液III、溶液PB和溶液IV对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。本试剂kit盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。本产品供从业人员的科学研究用，不得用于临床诊断，不得用于食品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。