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压片法压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间,综合玻片标本,施加一定压力,将组织细胞压散的一种制片方法。压片法的一般过程:(1)取材。观察细胞分裂,应选取细胞分裂旺盛、新鲜的组织细胞为材料。如根尖、茎尖分生组织、细胞、花药(花粉母细胞)。精母细胞等。(2)固定。材料固定可根据需要而定,取材后立即压片观察,可不作单独固定处理(与染色同步进行);取材后不立即视察,可将材料用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定。固定2~24小时(因材料而异)后用95%乙醇清洗,保存于70%乙醇中,备用。(3)离析。对细胞不易散开材料用水解分离液(如1NHCl或盐酸一酒精)处理,一般处理6~20min,解离后经水漂洗后方能染色。(4)染色。染色剂种类很多。观察染色体常用醋酸洋红染色液染色。(5)压片。将材料放在载玻片上,加一滴清水或染液,玻片标本批发,盖上盖玻片用拇指轻轻压片。(6)观察。压片后,即可在显微镜下观察。
制作方法
渗蜡
将完成透明步骤的组织块浸入透明剂与石蜡混合液中,不断提高石蜡的比例,直至用石蜡完全置换了组织块中的透明剂,便于今后的包理与切片。 石蜡有液态与固态二种,渗蜡要在恒定温箱(60°c)中进行,以保证石蜡处于液态中。
包理
组织块经石蜡渗透后,其内部间隙已完全被石蜡占据,厦门玻片标本,此时还需要用同种硬度的石蜡包理成蜡块以利于后边的切片,包理可用相同的器具,也可折叠一牛皮纸盒。
将液态石蜡缓缓倒入纸盒中,显微镜切片玻片标本,再用镊子轻轻将浸好蜡的组织块夹入纸盒,浅埋在石蜡内,待石蜡冷却成固态即包埋完毕。 至此,一块组织已完成前处理过程,可以切片,前边的步骤表明看来既无高深的理论,又无复杂的技术,一切看似简单,但一步做不到都会造成整个制片的前功尽弃。
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